1. 抗乙型肝炎病毒药物研发
1.1 体外抗HBV病毒药物细胞筛选模型
1.1.1 HepG2.2.15细胞模型: 该模型采用转染人HBV全基因的HepG2细胞,可用于评价药物对 HBV 病毒复的制抑制作用,包括:
a) 培养上清液HBsAg 和 HBeAg
b) 细胞培养上清液HBV-DNA、HBV-cccDNA、细胞内HBV-DNA
1.1.2 DHBV感染鸭原代肝细胞模型
该技术采用通过两步灌注法制备的DHBV感染绍兴麻鸭原代肝细胞进行抗HBV药物筛选,包括细胞培养上清液DHBV-DNA、细胞内DHBV-DNA。
1.2 体内抗HBV病毒药物筛选评价模型
1.2.1体内抗鸭乙肝病毒(DHBV)模型
本方法采用DHBV阳性麻鸭(按病毒浓度进行分组,每组8-10只麻鸭),按设计药物给药途径和剂量给药,共给药 10 天,于第 5、10 天及停药后 5 天采血,用荧光定量PCR法检测鸭血清 DHBV-DNA 水平,同时根据病理切片观察肝脏病变情况。计算DHBV-DNA抑制率和肝病变抑制率,评估待测药物的抗病毒及减轻肝损伤的效果。
1.2.2 HBV转基因小鼠模型
本方法采用转基因小鼠(按照HBV病毒浓度进行分组)。按设计给药途径和剂量给药,共给药21天,然后停药7天,其中每隔7天采血,用荧光定量PCR法检测血清HBV-DNA及HBV-cccDNA。
2. 抗丙型肝炎病毒药物
2.1黄病毒模拟HCV感染细胞模型:牛病毒性腹泻粘膜病毒 (BVDV)模拟HCV
丙型肝炎病毒(HCV)颗粒在体外培养增殖是很困难的.建立HCV RNA的复制系统可以评价药物抑制HCV复制的效果,但由于HCV病毒粒子不能完成一个完整的复制过程,目前不能鉴定药物抗HCV是作用于病毒复制周期的早期阶段还是晚期阶段。牛病毒性腹泻-粘膜病毒(BVDV)和HCV有许多相似地方, 是HCV理想的模型病毒株。
药物以无毒浓度作用于感染BVDV的MDBK细胞,以定量PCR法测定BVDV病毒载量,以评价药物对BVDV复制的抑制作用。
2.2 HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂筛选模型
以合成多肽为底物,用荧光共振能量转移技术筛选HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的抑制剂