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抗肝炎病毒药物筛选
更新时间:2015-12-12 21:35:14
详细介绍:

 乙肝和丙肝是威胁我国人群健康的主要病毒性感染。据专家估计,乙肝病毒携带者占我国总人口数的8%-10%(约一亿四千万人)。我国丙肝患者人数虽然不如乙肝患者人数多,但也呈现逐年上升的趋势。

慢性乙肝和丙肝患者中相当一部份会导致肝硬化以至肝癌。因此开发新型的抗乙肝和丙肝药物(包括小分子化合物,生物药物和疫苗)是一个急迫的任务。
健安团队有着多年的乙肝和丙肝药物研发经验。可以为国内大学,研究所和医药公司提供体内和体外药物筛选和评估。

1. 抗乙型肝炎病毒药物研发

1.1 体外抗HBV病毒药物细胞筛选模型
1.1.1 HepG2.2.15细胞模型: 该模型采用转染人HBV全基因的HepG2细胞,可用于评价药物对 HBV 病毒复的制抑制作用,包括:
         a) 培养上清液HBsAg  HBeAg
         b) 细胞培养上清液HBV-DNAHBV-cccDNA、细胞内HBV-DNA
 1.1.2 DHBV感染鸭原代肝细胞模型
       该技术采用通过两步灌注法制备的DHBV感染绍兴麻鸭原代肝细胞进行抗HBV药物筛选,包括细胞培养上清液DHBV-DNA、细胞内DHBV-DNA
 
1.2 体内抗HBV病毒药物筛选评价模型
1.2.1体内抗鸭乙肝病毒(DHBV)模型
本方法采用DHBV阳性麻鸭(按病毒浓度进行分组,每组8-10只麻鸭),按设计药物给药途径和剂量给药,共给药 10 天,于第 510 天及停药后 5 天采血,用荧光定量PCR法检测鸭血清 DHBV-DNA 水平,同时根据病理切片观察肝脏病变情况。计算DHBV-DNA抑制率和肝病变抑制率,评估待测药物的抗病毒及减轻肝损伤的效果。
1.2.2 HBV转基因小鼠模型
本方法采用转基因小鼠(按照HBV病毒浓度进行分组)。按设计给药途径和剂量给药,共给药21天,然后停药7天,其中每隔7天采血,用荧光定量PCR法检测血清HBV-DNAHBV-cccDNA
 
2. 抗丙型肝炎病毒药物
2.1黄病毒模拟HCV感染细胞模型:牛病毒性腹泻粘膜病毒 (BVDV)模拟HCV
   丙型肝炎病毒(HCV)颗粒在体外培养增殖是很困难的.建立HCV RNA的复制系统可以评价药物抑制HCV复制的效果,但由于HCV病毒粒子不能完成一个完整的复制过程,目前不能鉴定药物抗HCV是作用于病毒复制周期的早期阶段还是晚期阶段。牛病毒性腹泻-粘膜病毒(BVDV)HCV有许多相似地方, HCV理想的模型病毒株。
   药物以无毒浓度作用于感染BVDVMDBK细胞,以定量PCR法测定BVDV病毒载量,以评价药物对BVDV复制的抑制作用。
2.2 HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂筛选模型
   以合成多肽为底物,用荧光共振能量转移技术筛选HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的抑制剂
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